조직검사 의뢰 시 10% 중성 포르말린의 양은 조직부피의 10배가 이상적이며 최소 5배가 추천됩니다. 또한, 가급적 포르말린에 혈액이 오염되는 것을 최소화해주십시오.
조직의뢰 용기의 입구는 넓은 것이 좋습니다. 조직통의 입구가 좁을 경우 포르말린에 고정된 조직은 처음 보다 경도가 단단하여 꺼내기 어려울 수가 있습니다. 또한 간혹 포르말린이 세는 경우가 있으니 운반 도중에 세지 않도록 한 번 더 Ziplock 비닐이나 플라스틱 용기에 넣어 주시기 바랍니다.
조직의 크기 (특히 비장 등과 같이 혈액이 많은 장기)가 너무 크면 고정이 잘 안되기 때문에 검사 결과에 영향을 미칠 수도 있으니 표면에 칼집을 깊이 내어 주시거나 몇 개로 나누어 의뢰하여 주세요.
[SAMPLE] 조직이 커서 고정이 안되는 CASE
Splenic hemangiosarcoma가 의심이 될 경우에 출혈이 심한 종양의 중심부 보다는 정상 조직과 접해 있는 가장자리에서 조직을 채취하는 것이 종양진단 확률을 높여줍니다.
조직 채취 시 가장자리를 너무 고온으로 지지거나 아니면 포셉 등으로 세게 잡아당기면 crush에 의한 artifact가 생겨 조직 판독에 어려움이 있을 수 있습니다.
[SAMPLE] 조직 채취 시 Laser에 의한 손상으로 조직 판독 어려움
상악이나 하악(이빨 포함), 다리(뼈 포함), 발가락(뼈 포함)은 탈회 과정이 필요하며 과도한 탈회 고정은 조직 판독에 영향을 미칠 수 있으므로 가능한 병변 부위를 중심으로 의뢰하여 주십시오.
유선의 경우 병변 부위를 중심으로 분방, 결절 단위로 의뢰해 주시고 여러 분방을 한 번에 채취하여 보내는 것은 지양하여 주십시오.
작은 병변을 포함한 큰 조직의 경우 고정 전과 달리 고정 후에는 주변 조직도 같이 고정되므로 병변을 찾는데 어려움이 있습니다. 이를 고려하여 가능하시면 병변 부위를 marker pen이나 suture등과 같은 방법을 이용하여 표시해주시면 병변을 찾는데 많은 도움이 됩니다.
신속하고 정확한 검사를 위해서 번거로우시더라도 조직 검사 시 요구하는 항목들에 대하여 가급적 자세히 기술해 주세요(사진을 첨부해주시면 더 좋습니다).
종양의 margin evaluation이 필요할 경우 조직용 ink를 사용해서 marking을 해주십시오.
조직 검사는 각 각의 장기를 기본으로 검사가 이루어지므로 한 군데 이상의 장기를 의뢰하실 경우에는 각각의 용기를 사용해 주시기 바랍니다.
피부조직 생검 시 참고사항
육안 질병사진이 매우 중요합니다. 가능하면 꼭 보내주시기 바랍니다. 진단에 굉장한 도움이 됩니다.
Surgical preparation을 하지 말아 주십시오. 궤양성 병변이나 가피가 형성된 병변의 경우 surgical prep을 할 경우 중요한 질병의 정보가 없어지게 됩니다.
가피를 꼭 biopsy에 첨부해 주십시오. 가피는 샘플 수에 포함되지 않습니다.
병변의 위치를 명확히 기재해 주시기 바랍니다. 질병진단에 매우 중요합니다.
Punch biopsy를 하실 경우에는 6mm 이상을 권합니다. 8mm 가 이상적이고 더 큰 incisional biopsy도 좋습니다. 4mm punch biopsy로는 거의 의미있는 진단이 어렵습니다.
궤양성 병변을 포함한 면역성 질병이 의심될 경우, 병변과 비병변이 만나는 가장자리를 포함하는 biopsy를 해주십시오.
탈모성 병변의 경우에는 가장자리에서 하나 그리고 탈모가 가장 많이 진행된 중간자리에서 하나를 biopsy에 포함시켜주십시오.
종양이 의심이 될 경우에는 처음부터 완전하게 제거하시는 것이 좋습니다. Punch biopsy등을 하실 경우 종양세포를 피부 깊숙이 접종하는 경우가 발생합니다.
골조직 생검 시 의뢰 요령
Bone 샘플들은 조직 검사를 위해서 탈회를 오래 할 경우에 조직상태나 나빠져 HE 또는 특수염색에 지장을 주거나 면역염색도 잘 안 되는 경우가 많으니 참고하여 주시기 바랍니다.
크기가 크거나 괴사성 골병변의 경우 탈회하기 전 종양조직이나 단단하지 않은 골수, 괴사부위를 먼저 발췌하여 포르말린에 고정해 두고, 나머지 골조직을 탈회한 후, 2개의 카세트에 각각 담아서 프로세싱 하게 됩니다. 크기가 작은 bone core punch나 true-cut biopsy일 경우에는 약 2시간정도 탈회한 후에 조직을 처리하면 염색 퀄리티에도 문제가 없기 때문에 이렇게 진행됩니다.
1Site 기준
안구, 부신, 갑상샘 등과 같이 쌍으로 이루어진 장기의 경우 좌측과 우측을 각각 1 site로 간주합니다.
유선의 경우 1개의 분방을 1 site로 간주하나, 종괴(결절)가 다수일 경우 종괴 하나 당 1site로 간주합니다.
endoscopic biopsy의 경우 각 부위 위, 소장(십이지장, 공장, 회장), 대장(맹장, 결장, 직장)을 각각1site로 간주하며 부위 당 5개 까지의 endoscopic biopsy를 기준으로 합니다.
피부는 같은 유형의 병변일 경우에 한하여 3개의 punch biopsy 또는 small incisional biopsy를 1site 로 간주합니다.
간의 true cut biopsy 등 하나의 덩어리 병변에서 몇 개의 조각으로 의뢰되는 경우 5개 까지를 1site로 간주합니다.
2. 세포검사
샘플 채취요령
혈액오염의 최소화를 위해 부드럽고 혈관이 많은 병변의 흡인 시 주사기의 음압 없이 바늘만을 주입하여 샘플을 확보해야 합니다.
흡인시간을 30초 이내로 하고 흡인 후에는 즉시 도말을 만들어서 세포가 잘 보존되도록 합니다.
병변이 클 경우 2-3곳에서 별도의 샘플을 수집하여 의뢰합니다.
각각의 흡인 샘플로부터 2개의 슬라이드를 제작하여 의뢰합니다.
만약 세포 수가 적을 경우 보다 큰 바늘과 주사기를 이용하고, 음압을 걸어 샘플량을 증가시키는 것이 좋습니다.
일반적으로 주사 바늘 안에 있는 샘플이면 충분하며, 추가적인 채취 시도에 의한 혈액 오염에 유의하여 주십시오.
주사기안에 혈액이 보이면 채취를 즉시 중단하고, 새로운 바늘과 주사기를 이용하여 재 채취하여야 합니다.
슬라이드 제작요령
슬라이드를 면포 등을 이용하여 깨끗하게 닦은 후 슬라이드를 제작하여야 하며, 손으로 만지는 것을 최소화하여 손에서 떨어지는 각질에 의한 오염을 최소화해야 합니다.
연필을 이용하여 환자 이름과 병변 부위를 슬라이드 위에 명확하게 기재합니다.
관찰이 필요한 부위가 있을 때에는 슬라이드 뒷면에 마커를 이용하여 표시해 주시면 검사에 도움이 됩니다.
각 채취부위로부터 두 장의 슬라이드를 제작합니다.
두 장의 슬라이드를 겹쳐서 누르면서 도말표본을 제작할 때에는 아래 방향으로 힘을 가하지 않도록 합니다. 슬라이드를 올린 후 미끄러지게 하는 것만으로 충분합니다.
도말표본 제작 후 슬라이드를 헤어드라이어를 사용하거나 흔들어서 신속하게 건조시켜야 합니다.
주사침내에 흡인한 샘플을 슬라이드 위에 뿌리게 되면 두꺼운 세포덩어리들로 인해 개별 세포의 세포학적 검사가 어려우니 주의바랍니다.
다량의 혈액 또는 두꺼운 세포 덩어리는 정확한 세포학적 평가에 방해됩니다.
표본을 슬라이드의 끝 부분에서 만들 경우 염색이 잘 안되거나 손에서 탈락한 각질 오염의 가능성이 높아지므로 주의바랍니다.
염색법
염색액을 담은 병을 밀봉하여 증발로 인한 염색액 소실을 최소화합니다. (특히 첫번째의 고정액)
도말표본을 만들기 전에 표본이 완전하게 건조된 것을 확인합니다.
염색이 과도하게 되지 않도록 주의합니다. 약하게 염색된 도말표본의 경우에는 추가적인 염색이 가능합니다.
표면의 궤양성 병변이 아님에도 세균이나 곰팡이가 관찰된다면 염색액이 오염된 것으로 판단하고 교체해야 합니다. (사용하지 않은 깨끗한 슬라이드를 이용하여 확인이 가능함)
염색액의 침전물은 세포이외 청색의 과립성 또는 뭉쳐진 물질로 관찰되므로 염색액에 침전물이 생겼을 경우 교체해야 합니다.
오래된 염색액은 염색능이 소실되므로 교체해야 합니다.
도말표본을 만든 후 두께와 염색 강도를 평가하여 나름대로의 방법을 확립해야 합니다.
슬라이드 송부요령
각 병변 부위로부터 제작된 2-3개의 도말표본을 송부합니다.
각각의 슬라이드를 명확하게 표시하여야 합니다.
슬라이드를 단단한 슬라이드 송부용 박스에 넣어서 의뢰합니다.
진단 가능성을 높이기 위하여, 슬라이드를 제작한 후 세포가 적절하게 채취되었는지를 확인한 후 송부해야 합니다. 세포수가 너무 적은 경우 세포 불충분으로 인하여 진단되지 않는 경우가 발생합니다. (반복적인 흡인에도 세포수가 너무 적은 경우에는 생검에 대한 조직병리학적 검사가 추천됩니다)
도말 표본을 자체 염색할 경우 염색되지 않은 도말 표본을 함께 송부할 것.
염색되지 않은 슬라이드 송부 시 포르말린 병과 분리하여 보내야 합니다. 포르말린 증기는 염색의 질과 강도에 영향을 주어 세포학적 진단을 어렵게 합니다.
액체 샘플 (복수 등)을 송부할 때에는 병원에서 만든 도말표본과 함께, EDTA 튜브나 멸균 튜브에 액체를 넣어 함께 보내는 것이 추천됩니다.
세포검사시 필요한 추가정보
적절한 임상 정보는 세포학적 진단에 영향을 주는 매우 중요한 요소입니다. - 품종, 나이, 명확하고 간결한 환자 병력 등
검사 의뢰 시 병변 소견을 포함하는 것이 매우 중요합니다. - 관찰 기간, 병변의 육안적 소견(크기, 위치, 궤양여부, 경도, 유동성 여부, 등), 흡인 시 동반된 액체의 양, 점도 및 색깔 등.